スイフトジーン®
ノロウイルスGⅠ/GⅡ「カイノス」

スイフトジーン®　ノロウイルスGⅠ/GⅡ「カイノス」とは

ノロウイルスとは?

ノロウイルス（Norovirus）は急性胃腸炎の病原体として知られる 1 本鎖 RNA ウイルスです。感染力が強く、あらゆる年齢層に感染し集団食中毒や集団感染を引き起こすため、公衆衛生上重要なウイルスです。ノロウイルスは遺伝的に多様であり、主に GenogroupⅠ（GⅠ）及び GenogroupⅡ（GⅡ）の 2 つの遺伝子群に分類され、さらに各遺伝子群は GⅠで 15 種類、GⅡで 18 種類の遺伝子型 genotype に分類されます。 ノロウイルスの粒子は直径 30-38 nm の正二十面体であり、ウイルスの中では小さい部類に属します。

エンベロープを持たないRNAウイルス
カリシウイルス科（Family:Caliciviridae）
ノロウイルス属（Genus:Norovirus, “Norwalk-like virus”）
（SRSV: Small Round-Structured Virus）
ノーウォークウイルス（Species: Norwalk virus）
サポウイルス属（Genus: Sapovirus, “Sapporo-like virus”）
サッポロウイルス（Species: Sapporo virus）
ラゴウイルス属（Genus Lagovirus）
RHDV（Rabbit hemorrhagic disease virus）
ベシウイルス属（Genus Vesivirus）
VESV（Vesicular exanthema of swine virus）

感染経路

ノロウイルスによる感染症は、ウイルスを蓄積した二枚貝（カキ・アサリ・シジミなど）の生食・半生食（半生のカキフライ・アサリの酒蒸し・シジミの醤油漬けなど）およびウイルスで汚染された食品を摂取して経口感染するもの（食中毒）と、食中毒によって感染した患者（あるいは二次感染した患者）の糞便や嘔吐物に排出されたウイルスから経口感染するもの（伝染性胃腸炎）の二つに分けられます。

直接摂取した食品から発生するため、食中毒のケースが特に問題とされますが、医学上は食中毒と伝染性胃腸炎のケースに明確な違いはありません。

症状

症状の始まりは突発的に起こることが多く、嘔吐、下痢、腹痛等が起こり、吐き気が治まった後は悪寒・発熱を伴うこともあります。これらの症状は通常1～2日で治癒し、後遺症が残ることもありません。

ただし、免疫力の低下した老人では死亡した例も報告されています。また、感染しても発症しないまま終わる場合（不顕性感染）や、風邪と同様の症状が現れるのみの場合もあります。

「嘔吐、下痢、腹痛を伴う風邪」という表現がありますが、それはノロウイルスなどによる感染症である可能性もあり、単なる風邪ではない場合があります。ノロウイルスによる感染が成立している場合、糞便中にはウイルス粒子が排出されています。

診断

スイフトジーン®　ノロウイルスGⅠ/GⅡ「カイノス」の測定原理

『スイフトジーン®　ノロウイルスGⅠ/GⅡ「カイノス」』は、NASBA法と核酸クロマトグラフィーを組み合わせた、ノロウイルス遺伝子を検出するための研究用試薬です。

核酸クロマトグラフィーの原理

メンブレン上の捕捉オリゴプローブと、展開液中に処方された着色ラテックス標識オリゴプローブによる、NASBA産物のサンドイッチハイブリダイゼーションによって検出します。

キットの外観

使用方法

あらかじめ、検体から RNA を抽出します。検体からの RNA 抽出には、各施設で使用されている RNA 試薬 (EXTRAGENⅡ等) を使用してください。

NASBA反応溶液:NASBA 試薬 1 チューブにプライマー溶液を 55 μL 加え、直ちにボルテックスミキサーにて十分に溶解します。

付属の反応用チューブに NASBA 反応溶液を 5 μL ずつ分注します。

1）の検体前処理で得た抽出 RNA を 2.5 μL ずつ 各チューブに分注します。分注後、10 回ピペッティングし混和します。

各チューブをヒートブロック (65℃) で 5 分間保温します。

保温後、ヒートブロック（41℃）で 5 分間保温します。なお、この保温中に NASBA 酵素液を調製してください。

NASBA 酵素試薬 に 30 μL の精製水を加え、10 秒程度待ってからタッピングにより溶解します。

各チューブをヒートブロックに入れた状態のまま、NASBA 酵素液を 2.5 μL ずつ添加し、4～5 回ピペッティングして混合します。

ヒートブロック（41℃）で 90 分間保温します。

増幅反応終了後のチューブに、展開液を 3滴 滴下します。

チューブに検出ストリップを入れて 3 回出し入れを行います。

チューブに検出ストリップを入れてから 20 分後に結果を判定します。

判定例

メンブレン上の別々の位置に GⅠ及び GⅡ遺伝子捕捉用オリゴプローブを固相化しており、1 回の検出でノロウイルスの遺伝子群を識別します。

抽出法

抽出方法の一例

前処理

糞便を PBS (-) 又は生理食塩水で溶解し、10 % 乳剤を作成します。

糞便の 10 % 乳剤を激しく撹拌します。

10,000～12,000rpm, 20minで遠心します。(4℃冷却遠心を推奨します。)

遠心上清を回収し、RNA 抽出を行います。

EXTRAGENⅡを使用

変性工程

微量遠心チューブに、試薬 1 を 2 μL、検体を 100 μL 分注します。

室温で 10 秒間激しく撹拌します。

試薬 2 を 500 μL 加えます。

室温で 10 秒間激しく撹拌します。

12,000 ～ 15,000 rpm, 3 min で遠心します。(4℃ 冷却遠心を推奨します。)

上清を吸引除去します。

洗浄工程

試薬 3 を 200 μL 加えます。

室温で 10 秒間激しく撹拌します。

12,000 ～ 15,000 rpm, 3 min で遠心します。(4℃冷却遠心を推奨します。)

上清を吸引除去します。

溶解

RNA はチューブ内のペレットに含まれています。精製水を 250 μL 加え、溶解します。